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之前我們和大家聊過(guò)有關(guān)重組蛋白表達因為設計問(wèn)題而導致的表達異常情況，可以說(shuō)，它是蛋白表達失敗很重要的一個(gè)原因。今天，我們再和大家聊聊有關(guān)因為操作方面失誤而導致的相關(guān)問(wèn)題，希望對大家的實(shí)驗有所幫助。
其實(shí)，重組蛋白表達失誤的情況并不少見(jiàn)，只要注意如下幾點(diǎn)，一般都不成問(wèn)題。
1、質(zhì)粒構建問(wèn)題。當我們在完成質(zhì)粒構建后，除了普通的酶切鑒定和PCR鑒定外，還需要進(jìn)行質(zhì)粒的測序工作，只有在確保無(wú)任何突變的情況下，我們才能對其進(jìn)行下一步實(shí)驗。當然了，出現序列缺失或多余的情況就更不能進(jìn)行實(shí)驗了;
2、宿主菌確定。在進(jìn)行表達之前，我們需要確定宿主菌是正確可用的，如果有問(wèn)題，則會(huì )直接造成表達失敗;
3、蛋白降解問(wèn)題。一般來(lái)說(shuō)，宿主菌內存在很多蛋白酶，它會(huì )造成蛋白的降解。所以，很多情況下，并不是蛋白沒(méi)有表達，而是表達出來(lái)后又被降解了，這樣，也很難讓我們檢測到蛋白的存在。一般這個(gè)時(shí)候，我們需要加入一些藥劑來(lái)抑制蛋白酶的產(chǎn)生;
4、培養基問(wèn)題。選錯培養基，或者選擇的培養基營(yíng)養液錯誤，也可能會(huì )造成表達失敗(選擇合適的培養基即可);
5、分子異常情況。蛋白的分子量或大小等相關(guān)因素與預期偏差較大，這個(gè)可以說(shuō)是因為設計或者中間過(guò)程出現了偏差導致，我們需要進(jìn)行相關(guān)分析后再次進(jìn)行表達;
總的來(lái)說(shuō)，因為操作錯誤導致蛋白表達異常的情況還是比較多的，這就要求我們在日常實(shí)驗中多注重細節問(wèn)題，只有做好了這些方面的工作，才能保證重組蛋白的高效表達。當然了，影響蛋白表達的因素還有很多，這就需要我們做好各類(lèi)檢測工作，只有達到了相應的需求后，才能進(jìn)一步保障實(shí)驗的成功率。普健生物專(zhuān)業(yè)為廣大用戶(hù)提供重組蛋白表達服務(wù)，如果您有相關(guān)需求，歡迎來(lái)電咨詢(xún)。
