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我們在進(jìn)行蛋白表達的時(shí)候常常會(huì )接觸到一個(gè)概念：原核表達和真核表達。起初我一直以為原核表達只是蛋白表達的一種方式，用來(lái)和真核蛋白表達進(jìn)行區分。但是后來(lái)才發(fā)現，這個(gè)表達的意義不止于此。為了讓大家更加方便地了解相關(guān)信息，普健生物在這里和大家具體聊聊。
什么是有原核蛋白表達?
所謂的原核蛋白表達其實(shí)就是通過(guò)基因克隆技術(shù)，將外源目的基因通過(guò)構建表達載體，并通過(guò)表達菌株，使得其在特定的原核生物中得以表達的方式。簡(jiǎn)單來(lái)說(shuō)，就是將目的基因克隆到載體的表達序列中，而后通過(guò)特定的原核生物表達出來(lái)的方式(目前最常用的表達菌株為大腸桿菌，也就是說(shuō)，絕大多數的目的基因都是在大腸桿菌中表達出來(lái)的)。
那么，原核蛋白表達的原理是什么呢?
按照宿主來(lái)分，原核表達系統常用的有大腸桿菌表達系統、芽孢桿菌表達系統、鏈霉菌表達系統。而大腸桿菌因為其遺傳背景清晰，目的蛋白表達水平高、培養周期短、抗污染能力強等優(yōu)點(diǎn)，使得其成為原核表達的首選。
原核蛋白表達的流程為：原核表達載體構建、轉化到高效的表達宿主中、目的蛋白誘導表達、細菌擴大培養、制備蛋白提取物、目的蛋白純化。
看這個(gè)過(guò)程，相信大家應該都不會(huì )覺(jué)得困難。確實(shí)，首先通過(guò)基因工程技術(shù)，將目的蛋白基因置入到載體基因中，這個(gè)過(guò)程可以說(shuō)非常的重要、而后通過(guò)一定的誘導手段，比如加入IPTG誘導劑，來(lái)誘導目的DNA的表達。當蛋白表達出來(lái)之后，我們再通過(guò)相應的方式，對所得蛋白進(jìn)行相關(guān)的檢測，比如考馬斯亮藍染色或免疫印跡等方法。相關(guān)檢測確定蛋白合格后，再通過(guò)蛋白純化的手段提純蛋白。
當然了，在這個(gè)過(guò)程中涉及到很多細節操作方面的問(wèn)題，而且涉及到很多操作方面的小技巧，這些方面都需要引起關(guān)注，可以說(shuō)，這些細節方面的問(wèn)題是實(shí)驗數據理想與否的關(guān)鍵因素。普健生物做為一家擁有15年蛋白制備經(jīng)驗的企業(yè)，專(zhuān)業(yè)為廣大用戶(hù)提供原核蛋白表達服務(wù)，如果您有相關(guān)需求，歡迎來(lái)電咨詢(xún)。
