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無(wú)論采用哪種表達系統表達蛋白時(shí)，都會(huì )遇到一些問(wèn)題，比如蛋白析出、蛋白表達量不高、表達條件不是最佳等等，使得所得蛋白沒(méi)有達到預期。其實(shí)，這個(gè)問(wèn)題除了我們在表達步驟設計上的問(wèn)題外，還有就是在一些操作細節上不太規范。那么，有沒(méi)有什么辦法來(lái)提升蛋白表達及其可溶比例呢?今天，普健生物就和大家具體聊聊。
1、優(yōu)化密碼子。根據表達系統對密碼子的偏好性進(jìn)行優(yōu)化篩選，提升表達效率。一般來(lái)說(shuō)，我們優(yōu)先選擇那些使用頻率大于20%的密碼子，避免因為不充足的tRNA庫，導致翻譯的延遲或錯配;
2、降低表達速率?？梢酝ㄟ^(guò)降低IPTG的誘導濃度來(lái)降低蛋白的表達速率，通過(guò)速度的降低，使得其折疊率得到更好的平衡，最終提升蛋白的可溶性;
3、控制好溫度。當溫度保持在37度時(shí)，蛋白就容易形成一些包涵體，而30度的表達條件則更容易產(chǎn)生可溶、有活性的蛋白。所以，我們在表達蛋白的是，盡量控制溫度保持在16、18或21度(當然了，在表達過(guò)程中會(huì )產(chǎn)生一定的熱量，我們需要做好溫度監控，及時(shí)予以調節);
4、改善細胞周質(zhì)載體。細胞周質(zhì)環(huán)境在一定長(cháng)度上制約著(zhù)蛋白的形成，優(yōu)勢的話(huà)更加有利于蛋白的折疊及二硫鍵形成;
當然了，還有很多其他方面的原因會(huì )制約到蛋白的表達和可溶性，我們在文章：蛋白表達-哪些因素會(huì )影響到蛋白表達?中和大家具體聊過(guò)，大家有興趣的話(huà)可以具體點(diǎn)擊閱讀一下。
其實(shí)在蛋白表達的過(guò)程中，因為選擇表達系統的不同、操作步驟不同、技術(shù)細節調整等一系列的差異下，都會(huì )造成所表達的蛋白和預期有著(zhù)一定的偏差，其實(shí)這是正常的。畢竟，制約著(zhù)表達成功與否的關(guān)鍵因素實(shí)在是太多了，只有將每個(gè)細節做到完善，才能表達出我們所需的蛋白。普健生物作為一家擁有15年蛋白表達經(jīng)驗的公司，專(zhuān)業(yè)為廣大用戶(hù)提供蛋白表達服務(wù)，如果您有相關(guān)需求，歡迎來(lái)電咨詢(xún)。
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