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在蛋白表達過(guò)程中，常常會(huì )遇到這樣或那樣的問(wèn)題，這些問(wèn)題會(huì )在極大程度上影響到蛋白表達的結果。無(wú)論是五大表達系統中的哪種，總會(huì )在操作過(guò)程中出現問(wèn)題。那么，蛋白表達過(guò)程中會(huì )遇到哪些問(wèn)題?如何規避這些問(wèn)題呢?今天，普健生物就和大家具體聊聊。
1、載體構建錯誤
其實(shí)這是一個(gè)新人常常會(huì )犯的錯誤，在克隆時(shí)弄錯讀碼框，導致蛋白無(wú)法表達。所以，在構建載體的時(shí)候，需要考慮好啟動(dòng)子、多克隆抗體位點(diǎn)終止子等等各方面的因素;
2、宿主菌選擇不當
對于不同的宿主菌來(lái)說(shuō)，其表達表達載體是各不相同的，對于一些特殊的載體來(lái)說(shuō)，甚至無(wú)法表達。一般在蛋白表達時(shí)，需要選擇合適的載體;
3、密碼子優(yōu)化
對密碼子進(jìn)行優(yōu)化，比如研究密碼子的偏愛(ài)性以及密碼子的使用頻率，對密碼子進(jìn)行優(yōu)化;
3、mRNA的穩定性
mRNA的穩定性直接影響到轉錄水平和翻譯水平，甚至對于那些擁有稀有密碼子的mRNA來(lái)說(shuō)，可能造成其表達問(wèn)題;
4、基因突變
堿基的缺失、插入或突變都有可能造成蛋白的翻譯問(wèn)題，所以，在進(jìn)行表達前，一定要通過(guò)測序來(lái)避免這種情況的發(fā)生;
操作過(guò)程中，有哪些問(wèn)題可以規避掉?
1、可溶蛋白如何獲取?
可以選擇表達量不高的蛋白表達系統，或者是選這有助于可溶性表達的融合蛋白表達系統;
2、什么溫度使得蛋白溶解度更大?
據統計，在37度環(huán)境下制備的蛋白容易生成包涵體，而30度環(huán)境下容易產(chǎn)生可溶性和活性都高的蛋白。當然了，對于一些特殊的蛋白來(lái)說(shuō)，15-20度的環(huán)境下蛋白產(chǎn)量最大;
3、包涵體、內毒素如何規避?
選擇合適的蛋白表達系統即可，一般來(lái)說(shuō)，在環(huán)境配置合適的情況下，就能更好地規避包涵體和內毒素的形成;
總的來(lái)說(shuō)，在蛋白表達的過(guò)程中，我們需要面對的問(wèn)題有很多，一些細節方面的問(wèn)題也更需要引起注意。所以，我們選擇好合適的表達系統，配置好相應的環(huán)境，并做好包涵體和內毒素的規避，這樣就能獲得更加合適的蛋白產(chǎn)品。普健生物專(zhuān)業(yè)為廣大用戶(hù)提供蛋白表達服務(wù)，如果您有相關(guān)需求，歡迎來(lái)電咨詢(xún)。
