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重組蛋白表達是現階段我們生產(chǎn)蛋白產(chǎn)品最常用的方法之一，它在極大程度上解決了天然蛋白抗體解決不了的問(wèn)題。但是，在日常我們表達蛋白的過(guò)程中，即便是按照實(shí)驗順序嚴格執行，依然會(huì )遇到很多的問(wèn)題，最終導致蛋白表達失敗的情況。在這里，普健生物具體和大家聊聊蛋白表達的一些常見(jiàn)問(wèn)題，及其對應的解決辦法。
1、設計方面的問(wèn)題
如果表達出來(lái)的蛋白出現密碼子移位、稀有子密碼問(wèn)題、信號肽問(wèn)題、蛋白大小問(wèn)題、標簽蛋白選擇問(wèn)題以及GC含量太高等問(wèn)題時(shí)，就是因為序列設計方面的問(wèn)題。這個(gè)時(shí)候我們就需要回憶反思一下，看看具體的問(wèn)題出來(lái)哪里，然后有針對性地進(jìn)行解決;
2、操作過(guò)程方面的問(wèn)題
操作過(guò)程方面的問(wèn)題主要出現在質(zhì)粒構建和表達工程菌使用等方面的失誤所造成。在質(zhì)粒構建完成后，必須測序確認，保證無(wú)突變更不能出現堿基多余或是缺失，并確認外源片段插入后讀框碼與載體步調完全一致才行。
而針對工程菌的使用，必須確認標準有效，與載體質(zhì)粒配套，否則，容易造成表達質(zhì)粒丟失的情況;
3、蛋白容易降解的問(wèn)題
很多蛋白在完成表達等一系列的過(guò)程后，我們卻無(wú)法分離或提純出來(lái)，主要是因為剛表達出來(lái)就被細菌內的蛋白酶降解掉了，這個(gè)時(shí)候我們就需要看看過(guò)程，尋找一下相應的解決辦法;
4、培養基的問(wèn)題
一些蛋白在LB培養基中表達不成功，但是換成TB或2*YT培養基后就能表達成功。所以，當無(wú)法表達成功時(shí)，我們可以考慮更換培養基來(lái)繼續表達;
5、分子量異常的問(wèn)題
有一些蛋白的分子量和我們的預想有著(zhù)一定的偏差，這個(gè)時(shí)候我們可以分析一下蛋白，看其本身氨基酸組合是否符合均態(tài)分布的規律。實(shí)驗過(guò)程中，我們需要仔細對比誘導/非誘導菌體蛋白帶譜差異，再結合數據進(jìn)行判斷;
當然了，蛋白表達中可能會(huì )遇到各種各樣的問(wèn)題，并不是我們如上所說(shuō)的幾種，我們也可以結合實(shí)驗數據，對比相關(guān)文獻進(jìn)行處理。當然了，實(shí)在解決不了的時(shí)候，可以考慮通過(guò)專(zhuān)業(yè)的蛋白表達公司來(lái)處理。普健生物專(zhuān)業(yè)為您提供蛋白抗體表達服務(wù)，如果您有相關(guān)需求，歡迎來(lái)電咨詢(xún)。
