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    有沒(méi)有什么辦法可以提升重組蛋白表達效率?

    發(fā)表時(shí)間:2023-01-12 訪(fǎng)問(wèn)次數:799

      對于重組蛋白表達來(lái)說(shuō),我們常常會(huì )在實(shí)驗過(guò)程中遇到這樣或那樣的問(wèn)題,最終導致蛋白表達的效果達不到我們的預期。雖然我們通過(guò)哺乳動(dòng)物表達系統克服了原核翻譯后修飾表達的問(wèn)題,而且通過(guò)瞬時(shí)表達和穩定轉染等一系列的方法有效地提升了表達率,但是也因為成本高、操作難度大,不適合小型公司的使用。

      那么,有沒(méi)有什么辦法可以提升小規模重組蛋白表達效率呢?答案是肯定的。

      方法一:序列優(yōu)化

      根據使用需求,設計最佳的編碼序列用于表達蛋白??偟膩?lái)說(shuō),就是在開(kāi)始蛋白表達之前,我們就通過(guò)密碼子優(yōu)化算法以及一些表達載體選擇,為表達提供優(yōu)質(zhì)的環(huán)境,這樣能在極大程度上提升蛋白表達的效率;

      方法二:提升蛋白溶解度

      因為溶解度低的問(wèn)題,也會(huì )導致蛋白表達的效率降低。因此,我們可以通過(guò)溫度調控、培養基選擇、加入一些添加劑等方法來(lái)提升蛋白溶解度,以便于提升蛋白的表達效率;

      方法三:輔助融合劑使用

      比如蛋白標簽的使用。我們知道,當我們將標簽蛋白插入到重組蛋白表達序列上時(shí),蛋白的表達效率就能夠得到有效的提升,而后再通過(guò)酶切或添加化學(xué)試劑的方式切除的方式去除。當然了,在選擇之前,我們需要針對特定的表達系統選擇合適的標簽,這個(gè)需要結合多種因素進(jìn)行考慮;

      方法四:純化方法優(yōu)化

      針對下游的使用需求和純度需求來(lái)設計不同的純化方法。一般來(lái)說(shuō),對于蛋白表達量高的可以考慮一步式親和純化,如果需要進(jìn)一步純化,可使用親和純化后分子排阻色譜進(jìn)行。當然了,在不同情況下,也可以考慮使用離子交互色譜;

      通過(guò)如上的方法,再結合自己的需求來(lái)設計,這樣就能在一定程度上提升蛋白的表現率。當然了,針對不同的情況,還可以適當的增加一些其他方法,畢竟不同的使用環(huán)境下,方法也是各不相同的。普健生物專(zhuān)業(yè)為廣大用戶(hù)提供重組蛋白表達服務(wù),如果您有相關(guān)需求,歡迎來(lái)電咨詢(xún)。

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