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重組蛋白表達和傳統的蛋白表達方式有一定的區別，因為其通過(guò)基因重組后表達，所以容易造成一些傳統表達中不會(huì )遇到的問(wèn)題。雖然說(shuō)這個(gè)問(wèn)題是一個(gè)老生常談的話(huà)題了，但是，其重要程度卻不言而喻。那么，哪些因素會(huì )影響到重組蛋白表達的結果呢?普健生物在這里和大家具體聊聊。
1、載體構建錯誤
其實(shí)這是一個(gè)新人最常犯的錯誤，因為弄錯讀碼框，導致蛋白出現不表達的情況。載體的構建可以說(shuō)是蛋白表達的基礎，需要考慮到啟動(dòng)子、克隆位點(diǎn)、終止子、標簽等多種因素，只有將這一步做好了，重組蛋白表達才能夠進(jìn)行下去;
2、宿主菌選擇不當
不同的菌種因為其基因型不同，適合于表達的蛋白也是各不相同的。如果選擇不當，不僅會(huì )造成蛋白表達率低，甚至可能因為內毒素的緣故，造成蛋白性質(zhì)改變的情況;
3、密碼子優(yōu)化不當
不同的基因在密碼子的使用上有著(zhù)明顯的偏愛(ài)性，不同物種在啟動(dòng)子上也是各不相同，所以，一定要結合選擇宿主和目的基因的特性來(lái)選擇合適的啟動(dòng)子;
4、mRNA穩定性及結構
當mRNA穩定性不足，或者結構發(fā)生折疊后，會(huì )造成后期反轉錄時(shí)出現問(wèn)題，自然也就造成了蛋白表達不準確或發(fā)生沉淀等現象。一般來(lái)說(shuō)是因為環(huán)境因素影響，或者出現了內毒素等問(wèn)題;
5、發(fā)生基因突變
所需表達的基因序列發(fā)生了突變，所表達出來(lái)的蛋白已經(jīng)不是我們所需蛋白了，自然達不到我們的要求了。當然了，其他位置的基因發(fā)生突變也可能會(huì )造成蛋白不表達或表達率降低的情況;
總的來(lái)說(shuō)，重組蛋白表達在表達過(guò)程中，很多因素都可能會(huì )造成其表達率降低甚至不表達，這個(gè)時(shí)候，我們就需要通過(guò)分析，總結出其問(wèn)題所在，而后在予以整改，這樣才能保證所得蛋白達到我們的預期。當然了，很多時(shí)候，可能就是一個(gè)小問(wèn)題，需要有扎實(shí)的技術(shù)才可以，否則，非常的浪費時(shí)間。普健生物專(zhuān)業(yè)為廣大用戶(hù)提供重組蛋白表達服務(wù)，如果您有相關(guān)需求，歡迎來(lái)電咨詢(xún)。
