穩定細胞株構建的流程及其難點(diǎn)分析

　　就目前來(lái)說(shuō)，穩定細胞株和過(guò)表達細胞株是基因研究中最常用的方法，同時(shí)通過(guò)RNA感染技術(shù)，即可實(shí)現我們常說(shuō)的穩定細胞株構建。這個(gè)方法相對來(lái)說(shuō)相對困難，需要有一定技術(shù)實(shí)力的公司才能實(shí)現。有鑒于此，普健生物就在這里和大家具體聊聊有關(guān)穩定細胞株構建的流程及其重點(diǎn)難點(diǎn)分析。

　　穩定細胞株的構建流程：

　　1、構建載體。通過(guò)過(guò)表達或干擾載體的操作獲得合適的載體細胞;

　　2、病毒包裝。通過(guò)慢病毒包裝以及相關(guān)操作，獲得適合用于感染的病毒;

　　3、細胞轉染。將病毒轉染到目的細胞中，并篩選出轉染成功的細胞進(jìn)行細胞株培養;

　　4、藥物篩選。通過(guò)提純和篩選，獲得高純度的目的蛋白溶液;

　　5、蛋白功能分析。采用各種試劑進(jìn)行蛋白的相關(guān)功能分析，看其是否能夠能夠滿(mǎn)足我們的需求;

　　這個(gè)時(shí)候大家可能就覺(jué)得非常的奇怪了，明明這么簡(jiǎn)單的幾個(gè)步驟，怎么就困難了呢?下面，我們和大家具體分析一下穩定細胞株構建的難點(diǎn)所在。

　　1、所用細胞不合適。一般來(lái)說(shuō)，很多懸浮細胞對病毒的轉染效果并不好，而且操作過(guò)程非常的困難。還有就是對于那些極度敏感的細胞來(lái)說(shuō)，病毒的入侵可能直接造成細胞的死亡;

　　2、病毒超過(guò)了過(guò)表達細胞穩定性的極限?；驎?huì )通過(guò)病毒隨機插入到目的細胞的基因組中，而插入的基因可能會(huì )對已經(jīng)過(guò)表達細胞的穩定性造成影響，直接造成其無(wú)法表達的情況?；蛘咴诤罄m細胞傳代中，會(huì )出現基因表達逐漸下降的情況;

　　3、安全性不佳以及成本高。一般來(lái)說(shuō)病毒操作的成本都很高，即便幾千塊的病毒包裝都需要2-3周的時(shí)間去實(shí)現。而且病毒對人體都存在著(zhù)一定的感染性，需要的實(shí)驗室安全等級也較高;

　　4、病毒優(yōu)化和存儲性問(wèn)題。不同批次的病毒都會(huì )存在著(zhù)一定的差異，所以，每次實(shí)驗都需要對病毒進(jìn)行相關(guān)的檢測，以保證使用最優(yōu)病毒進(jìn)行實(shí)驗。同時(shí)，病毒都需要在-80度的環(huán)境下保存，時(shí)間超過(guò)2周都會(huì )出現活性下降的情況;

　　總的來(lái)說(shuō)，進(jìn)行穩定細胞株構建需要有更高的實(shí)驗成本和安全成本，只有在滿(mǎn)足了這兩項需求的前提下，我們才可以進(jìn)行后續的操作。而在進(jìn)行實(shí)驗的時(shí)候，我們需要針對其重點(diǎn)難點(diǎn)做好相應的備份和準備工作，這樣就需要有更高的技術(shù)去做支撐。只有做好了這些方面的工作，才能保證穩定細胞株得以構建。普健生物專(zhuān)業(yè)為廣大用戶(hù)提供穩定細胞株構建服務(wù)，如果您有相關(guān)需求，歡迎來(lái)電咨詢(xún)。