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在進(jìn)行重組蛋白制備的過(guò)程中，我們常常會(huì )遇到各種各樣的問(wèn)題，因為原料不同、制備環(huán)境不同、技術(shù)操作不同以及一些不規范的小錯誤，使得我們所要面對的問(wèn)題各不相同。當然了，隨著(zhù)技術(shù)的不斷完善，一些問(wèn)題得到了良好的解決。但是，因為一些操作，使得很多問(wèn)題依然存在。今天，普健生物在這里和大家具體聊聊有關(guān)重組蛋白純化過(guò)程中出現的沉淀現象的原因及避免方法。
1、鎳離子含量過(guò)高。在Ni純化過(guò)程中，一部分鎳離子會(huì )脫落，因為其屬于重金屬，會(huì )和蛋白凝集并產(chǎn)生沉淀;
2、我們搭建的環(huán)境不適合蛋白制備，需要重新考慮溶液濃度、PH值、溫度等方面的因素;
3、溶液PH值接近蛋白等電點(diǎn)(一般PH值接近等電點(diǎn)時(shí)，都容易造成蛋白沉淀);
4、使用反復凍融的蛋白。我們知道，每次凍融都會(huì )在一定概率上造成蛋白活性的丟失，反復凍融則會(huì )造成這個(gè)概率增加;
5、長(cháng)時(shí)間4度保存。長(cháng)時(shí)間將蛋白保持在4度環(huán)境下，容易滋生細菌，從而造成蛋白降解和沉淀;
如何避免這些問(wèn)題呢?
1、當我們用鎳柱來(lái)純化蛋白時(shí)，適當加入一些EDTA，從而減少重金屬反應;
2、重新分析蛋白的最佳制備環(huán)境，并保持好相應的制備環(huán)境;
3、加入一些輔助性蛋白來(lái)保護我們所制備的蛋白產(chǎn)品;
4、盡量減少蛋白的反復凍融，盡量制備出來(lái)后就使用掉;
5、短時(shí)間保存可考慮4度環(huán)境，長(cháng)期保存還是盡量選擇-20度或-80度;
其實(shí)大家不難發(fā)現，在我們進(jìn)行重組蛋白制備的時(shí)候，很多造成沉淀的情況都是一些小問(wèn)題所導致，只有將這些細節方面的工作做好了，蛋白純化工作才能更好地進(jìn)行。普健生物專(zhuān)業(yè)為廣大用戶(hù)提供優(yōu)質(zhì)的重組蛋白制備服務(wù)，如果您有相關(guān)需求，歡迎來(lái)電咨詢(xún)。
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