原核表達重組蛋白的一般步驟以及一些注意事項

　　原核表達相信大家一定不會(huì )陌生，簡(jiǎn)單來(lái)說(shuō)，就是將需要表達的基因克隆到大腸桿菌中后，大量表達蛋白的一種方式，在蛋白純化、定位、功能分析等方面都有著(zhù)廣泛的使用。那么，用大腸桿菌來(lái)表達重組蛋白有哪些好處?其步驟又是怎樣的呢?

　　大腸桿菌表達重組蛋白的好處：

　　1、控制簡(jiǎn)單。之前我們就和大家聊過(guò)，大腸桿菌背景清晰，且易于成長(cháng)和控制;

　　2、成本低。相對哺乳動(dòng)物表達系統來(lái)說(shuō)，大腸感覺(jué)表達蛋白的成本相對更低;

　　3、質(zhì)粒選擇多。擁有各種各樣的大腸桿菌菌株及其與之匹配的質(zhì)粒，選擇更多;

　　原核表達重組蛋白的步驟如下：

　　1、獲得目的基因。通過(guò)基因重組技術(shù)獲得我們所需基因，并對其進(jìn)行基因測序，以保障目的基因準確信;

　　2、準備表達載體。從大腸桿菌中找出合適與表達這段序列的質(zhì)粒;

　　3、將目的基因插入載體中。將目的基因通過(guò)切段、植入等一系列的手段添加到質(zhì)粒中;

　　4、宿主菌培養。對宿主菌進(jìn)行培養，實(shí)現擴增;

　　5、誘導蛋白表達。通過(guò)外部環(huán)境刺激，誘導所需蛋白得以表達;

　　6、蛋白分析。對所得蛋白在特異性、活性等方面進(jìn)行檢測，看其是否為所需蛋白;

　　7、擴增及純化。對符合需求的宿主菌進(jìn)行擴增，而后進(jìn)行大批量蛋白生產(chǎn)及純化;

　　大腸桿菌表達重組蛋白的注意事項：

　　1、需要根據蛋白的最終應用來(lái)考慮表達載體，可選擇融合表達;

　　2、融合表達時(shí)，外源DNA不能對轉錄、翻譯的過(guò)程造成干擾;

　　大家應該不難看出，原核表達重組蛋白的方式其實(shí)和普通原核蛋白表達的方式?jīng)]有太大的不同，只是說(shuō)在獲得目的基因的方式上有所不同，而且需要選擇特定的質(zhì)粒才能實(shí)現蛋白的表達。而就其他步驟而言，相差表達，但是在一些細節方面肯定會(huì )有所不同，這就需要有相關(guān)的經(jīng)驗來(lái)輔助了。普健生物專(zhuān)業(yè)為廣大用戶(hù)提供重組蛋白表達服務(wù)，如果您有相關(guān)需求，歡迎來(lái)電咨詢(xún)。

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